<p><em>Escherichia coli</em> merupakan bakteri yang paling banyak menyebabkan penyakit diare, mahalnya harga antibiotik dapat menjadi kendala utama bagi masyarakat ekonomi menengah keatas dalam mengobati penyakit infeksi bakteri, disamping itu penggunaan antibiotik yang tidak benar dapat menyebabkan resistensi. Maka sebab itu diperlukan antibiotik yang berbahan alami, murah dan memiliki efektivitas yang tinggi yaitu daun cincau hijau (<em>Cyclea barbata L</em><em>.</em>) penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya hambat ekstrak daun cincau hijau (<em>Cyclea barbata L</em><em>.</em>) terhadap bakteri <em>Escherichia coli.</em> Metode penelitian ini adalah deskriptif. Populasi pada penelitian ini adalah isolat bakteri <em>Escherichia coli</em> yang di dapat dari RSUD Jombang. Sampel pada penelitian ini adalah suspensi <em>Escherichia coli.</em> Teknik pengambilan sampel pada penelitian ini adalah simple random sampling. Metode penguji yang di gunakan adalah metode difusi cakram, menggunakan konsentrasi 50%,70%,90%,100% sebagai sampel uji <em>chlorampenicol</em> sebagai kontrol positif dan aquadest steril sebagai kontrol negatif. Analisa data yang digunakan coding dan tabulating. Berdasarkan penelitian ini diketahui bahwa zona hambat yang terbentuk pada rata-rata pada setiap konsentrasi 50% adalah 4,3 mm, pada konsentrasi 70% adalah 5,6 mm, pada konsentrasi 90% adalah 6 mm, pada konsentrasi 100% adalah 9,6 mm, pada kontrol positif di dapatkan rata-rata zona hambat 26,7 mm, pada kontrol negatif tidak terbentuknya zona hambat. Hal tersebut karena konsentrasi yang berbeda dan kandungan senyawa metobolit sekunder setiap konsentrasi juga berbeda. Kesimpulan uji daya hambat ekstrak daun cincau hijau (<em>Cyclea barbata L</em><em>.</em>) mampu menghambat pertumbuhan bakteri <em>Escherichia coli </em>dengan lemah dan sedang.</p>